Категории

Бактериологическая диагностика дисбактериоза кишечника

Дисбактериоз кишечника. Лечение. Алексей Яровой.

17. Микробиологическая диагностика кишечного дисбактериоза.

Главная » Гастроэнтерология » Бактериологическая диагностика дисбактериоза

Бактериологическая диагностика дисбактериоза

На мысль о дисбактериозе наводят постоянные, трудно поддающиеся лечению хронические колиты. У больных хроническим панкреатитом - кишечная дисфункция (при длительном приеме антибиотиков по поводу различных заболеваний). Окончательно диагноз подтверждается бактериологическим анализом кала.

Наиболее прост качественный метод исследования, который позволяет выявить качественные изменения постоянной и факультативной (привнесенной) микрофлоры кишечника. В основе этого метода лежит определение процентного соотношения колоний микроорганизмов.

Очень хорошим методом является метод количественного анализа (с обязательным вниманием к бифидобактериям). Такое исследование предполагает подсчет: сколько микроорганизмов каждого из интересующих исследователя видов приходится на 1 г фекалий. Подобный анализ позволяет выявить снижение или повышение содержания кишечной палочки, ее гемолитических (расщепляющих белки) или лактозонегативных колоний, количество стафилококка и энтерококка. Учет точного количества бактерий типа протея не проводится, так как выявление бактерий типа протея в любом количестве есть проявление кишечного дисбактериоза.

О состоянии анаэробной микрофлоры кишечника (то есть о количестве бифидобактерий) говорит минимальное разведение, в котором выявляются бифидобактерии.

Доказательством дисбактериоза является отсутствие роста бифидобактерии в разведении 10 : 7, резкое снижение количества кишечной палочки, появление расщепляющей белки кишечной палочки, большого количества лактозонегативных бактерий, расщепляющего белок стафилококка и протея, грибковых микроорганизмов типа кандида. Диагноз подтверждается также в тех случаях, когда кокковая микрофлора кишечника составляет более 25% от общего количества кишечной палочки.

A. Гocпoдapcкий, П. Лиcoвcкий

Дисбактериоз...

Дополнительная информация из раздела

Источник: https://lor.inventech.ru/gastro/dysbacteriosis-0013.shtml

Бактериологическая диагностика дисбактериоза кишечника. Методические рекомендации

Диагностика дисбактериоза кишечника

В отечественной практике диагностика и микробиология неотделимы друг от друга. Анализ кала даёт представление о составе флоры в толстой кишке. На этом диагностика дисбактериоза обычно заканчивается. Мамы собирают кал у грудничка, доктор ставит диагноз, составляется диета, подбираются смеси. Всякий, ощутивший зуд в заднем проходе, может попробовать аналогичный алгоритм действий. Однако, дисбактериоз оказывает тотальное влияние не только на ЖКТ. Алопеция, себорея порой служат симптомами либо являются прямым следствием дисбактериоза.

Не всякий образованный человек понимает, что причины избранных болезней берут начало в ЖКТ. Тяжёлый дисбактериоз служит причиной рака, прочих заболеваний, исключение – СПИД. В западных школах медицины на протяжении десятков лет утверждают, что диагностика одной толстой кишки не имеет практического смысла. Это состояние воспринимается следствием прочих заболеваний. В РФ доказали, что дисбактериоз у кормящей мамы ведёт к немедленному пополнению списка больных новорождёнными младенцами (на третьи сутки максимум).

Содержание

Микрофлора

Установлено, что совокупная численность микробов (500 видов) в человеке достигает десяти в 14 степени, что на порядок больше, нежели количество клеток, составляющих организм. Подавляющая часть флоры обитает в кишечнике, общим весом 1-2 кг. Традиционный бактериологический анализ затрагивает 10-15 видов из массы. Реальная картина происходящего в кишечнике отличается от результата анализа.

Типичные признаки, сопровождающие заболевание, к примеру, стафилококковый дисбактериоз кишечника, чётко описаны. Многие заболевания недостаточно изучены. Метеоризм при дисбактериозе наблюдается у большого количества пациентов. Но выделение газов происходит регулярно, человек на любой стадии развития постоянно выделяет водород и метан. Диагностика показывает – штаммы, не являющиеся частью нормальной микрофлоры, провоцируют обширное газообразование, сравнительно с нормой. Механизм вздутия слабо изучен, штаммы, его вызывающие, не определены до настоящего времени.

Получается, человек, исследуя океан и Луну, не знает многого о собственном теле. Не всякая мать сможет объяснить необходимость прикладывания ребенка к груди уже через 2 часа после родов. Таким образом происходит переход к формированию нормальной микрофлоры кишечника новорождённого.

Микрофлора кишечника

Не удивительно, что диагностика находится на низком уровне. При анализе необходимо учитывать разницу показателей у детей до года и детей старшего возраста. Игнорирование информации приведёт к неправильному диагнозу. Полное формирование микрофлоры заканчивается в 2 года.

Причин нарушению баланса изучено немало. К примеру, приём антибиотиков после операции. Лишь каждый десятый признан абсолютно здоровым в подобных условиях.

Методики исследования

Постоянно появляются новые методики исследования. К примеру, в 2001 году Hopkins предложил использовать молекулярно-генетический способ гибридизации 16 SrPHK. С высокой точностью определяются виды (что важно), но трудоёмкость и сложность подбора реактивов затрудняют исследования. Молекулярный метод основан на выявлении участков ДНК взаимодействующих видов при помощи электрофореза (либо отличающимся способом).

Метод ГХ-МС имеет немало общего с названным, ориентируется на ряд жирных кислот, производство которых тесно связано со структурой ДНК. Набор ЖК аналогичен «отпечаткам пальцев» исследуемой бактерии. Удаётся подобным образом идентифицировать несколько тысяч штаммов, в организме видов культур около 500. В последнее десятилетие серийно выпускается оборудование в указанной области. Остаётся составить карту наличия жирных кислот в продуктах жизнедеятельности определённых бактерий.

Сегодня ГХ-МС позволяет получить информацию о сотнях видов. Гораздо больше, чем любая методика. Точное определение возбудителей важно для выбора лечения. В результате выявляются патологии: выпадение волос, лишний вес, дерматиты, жжение в заднем проходе. Распознается набор штаммов, влияющий на развитие патологических состояний. В подобных случаях важна точная диагностика, для недопущения развития заболевания.

Исследование фагочувствтительности

Данные о фагочувствительности при помощи ГХ-МС заполучить чрезвычайно сложно. Сбор показаний зависит от чувствительности оборудования. В обычных условиях культура проращивается, уничтожается определённым образом (к примеру, при помощи грибов). Исследование включает улавливание специфичных веществ, служащих результатом успешной борьбы, позволяет составить прогноз заболевания, предоставляет информацию, эффективен ли воздействующий фактор.

Бактериологический анализ

Из горла берут мазок при выявлении заболеваний дыхательной системы, кровь сдают для оценки биохимических показателей, напрямую показывающих, здоров человек либо болен. Диагностика при дисбактериозе кишечника основывается на исследовании кала. По-другому проверить, что творится в недрах ЖКТ, затруднительно. На западе посев на питательные среды считают методом ненадёжным по перечисленным причинам.

Сложно выдержать идеальные условия

Правильный способ диагностического забора кала.

  1. Нужна герметичная стеклянная посуда, иначе воздух убьёт анаэробные бактерии (облигатная часть флоры).
  2. Маленькая посуда – воздух под крышкой уничтожит бифидобактерии и лактобациллы.
  3. Немедленно после сбора кала в количестве минимум 1 грамма следует плотно закупорить сосуд.
  4. Хранить анализ следует при температуре +4 градуса в течение четырёх часов. Получается, для выполнения условия банка должна оказаться на столике в лаборатории немедленно.

На западе трезво оценивают возможности лаборантов. Известно: открытие пенициллина произошло благодаря подобному нарушению. Александр Флеминг не выдержал идеальные условия выращивания опасного стафилококка. Вместе со штаммом на питательной среде поселился пенициллин.

Результат неточен

Забор кала предоставляет информацию о микрофлоре определённой части толстой кишки. Желательно анализу подвергать мукозную часть флоры, не полостную, как часто происходит в случае исследования фекалий. Непосредственно в слизистой происходят процессы формирования витаминов, всасывание микроэлементов. Кроме прочего, бактерии в экскрементах преимущественно мертвы.

По указанным причинам традиционный посев фекалий не является лучшим методом.

Суть метода

Суть заключается в посеве экскрементов на питательную среду. Бактерий множество, для каждого вида среда индивидуальна. По скорости роста штамма делаются выводы о начальной численности, оперируя таблицами норм. Сверяясь с данными, выставляется диагноз (отклонения популяции в меньшую либо большую сторону).

В заключение производится анализ обнаруженной условно-патогенной флоры на чувствительность к антибиотикам, назначается эффективный курс лечения. В комплексе, подобными мероприятиями ограничивается бактериологическая диагностика дисбактериоза кишечника.

ГХ-МС

Газовая хроматография в сочетании с масс-спектрометрией предоставляет преимущество в диагностировании, занимающее до 5 часов. Происходит в десятки раз быстрее, нежели выращивать экскременты. Методика не ищет живые бактерии, нацелена на обнаружение метаболитов микрофлоры, упрощающего процесс сбора анализов. Удешевляется сама операция, поскольку необходимость закупать дорогостоящую (преимущественно, патогенную) микрофлору отсутствует. Сложность резко снижается.

Врачи давно полагали, что существуют следы жизнедеятельности микроорганизмов, выбрасываемые в окружающую среду. Избыточный удельный вес результатов в испражнениях говорит о развитии определённого состояния. Результат интересен: в экскрементах присутствует полостная флора, и полный спектр метаболитов! Следовательно, живущие внутри организма виды бактерий (и грибов) определятся по следам метаболизма.

Рассказывая о гибели группы Дятлова, Ракитин говорил: по набору изотопов можно немало узнать о рабочем веществе реактора. Аналогия наблюдается в случае с микроорганизмами. Отходы жизнедеятельности сильно отличаются друг от друга, спутать затруднительно. Род определяется с точностью, определение вида допускает малую погрешность.

Георгий Осипов лестно отзывается о ГХ-МС. В первую очередь приводит доводы в пользу стоимости оборудования, упоминает о дешевизне расходных материалов. Не забывает про точность метода (до 2%). Завершающим доводом становится широкий спектр микроорганизмов, подверженных идентификации. Фактически, составляется полнейшая копрограмма, чрезвычайно сложная и затратная для получения традиционными методами.

Неотъемлемой частью методики является постоянство метаболитов. Доказано – за последние 2,5 млрд. лет процесс жизнедеятельности бактерий практически не менялся. Ошибочно полагать, что методика нова. Упоминания встречаются с 70-х годов XX века, первые серьёзные исследования проведены на базе РАМН в 90-е.

Суть метода

Проводится химическая реакция (к примеру, метанолиз) для выделения из пробы нужных компонентов. Превращение жирных кислот в метиловые эфиры лежит в основе анализа. Для указанного соблюдаются нужные условия, подготовка пробы занимает определённое время. Композиция эфиров представляет жидкость либо газ, вводимый в аппаратуру. Разделение производится на капиллярной колонке.

Получается гистограмма, где маркеры разделены расстоянием. Площади пиков интегрируются, выступая исходными данными дальнейших расчётов. Для любой молекулы сформированы признаки, используемые при идентификации. База данных покупается отдельно, исследование стоит денег. Возможности метода немало зависят от наличия информации. Недостаток веществ в базе данных делает невозможным идентификацию.

Спектр действия ГХ-МС крайне широк. Типичная база содержит признаки 1000 и более видов. Сообразно представленным данным, вычисляется плотность популяции штаммов.

ПЦР-диагностика

Лабораторная диагностика дисбактериоза не ограничивается двумя методиками. Потому что у врачей всегда должен быть выбор. Когда нет конкуренции, отсутствует и прогресс. Полимеразная цепная реакция работает с ДНК. Изобретена в 1983 году Кэри Мюллисом.

В заданных условиях происходит копирование имеющегося участка молекулы. Реакция проходит в пробирке под действием специальных ферментов. Зная последовательность нуклеотидов, легко предсказать результат. Постепенно открылись методы, минимизирующие число мутаций, результат анализа становится достоверным.

Длина копируемого участка ограничена, составляет 3000 звеньев. Для сравнения – геном человека кодируется при помощи 3 млрд. пар. В науке метод ПЦР часто используют для внесения намеренных мутаций в код ДНК. Это проверенный способ криминалистов вынести вердикт, сильно влияющий на решение суда. Сходство генов – надежное доказательство вины либо невиновности.

Какой анализ выбрать

У пациента клиники нет выбора. Сегодня диагностика проводится исключительно бактериологическая. На фоне дисбактериоза, осложнённого диареей, ожидание в течение 1 недели невыносимо. Как питаться больному ребёнку? Что делать взрослому?

Настоятельно рекомендуем внимательно собирать о симптомах нужную информацию. Если возникает аллергия из-за дисбактериоза, записывайте данные о местах возникновения дефектов. К примеру, аллергический вид крыльев носа указывает на дефицит витамина В. Покраснение в районе волосяной части головы – симптом себореи.

Как избежать

Диагностика по клиническим признакам сложновыполнима. Поможет информация о консистенции кала, цвете, запахе. Если грибковый дисбактериоз вызвал стоматит, немногие знают, с чего начинать лечение. Попутно с типичными в подобных случаях препаратами проводится диагностика баланса микрофлоры кишечника. Заодно оказывается помощь желудку.

На сайте представлена исчерпывающая информация по дисбактериозу, способная оказать весомую помощь. Полезно употреблять в пищу клетчатку, олигосахариды. Упоминалось о роли народных средств: пейте травы. Рост патогенной флоры подавляется при помощи ягод:

  • земляника, черноплодная рябина, черника, малина, чёрная смородина помогают в отношении сальмонелл и стафилококка;
  • абрикосы, клюква уничтожают микробы гниения;
  • голубика, брусника борются с Candida.

Включайте указанные продукты в рацион, практикуйте введение прикорма при дисбактериозе детям, формируя иммунитет. Детям младшего возраста дают отжатые соки. При лактазной недостаточ­ности сделайте акцент на бифидобактерии., растущие на молочном сахаре, играющие роль источника лактазы (либо заменителя). Покупайте ферменты отдельно, в аптеке.

Упорно продолжайте кормление грудью младенцев (не из бутылочки), правильным образом формируя внутреннюю микрофлору ребёнка. При запорах делайте акцент на продукты питания:

  1. Чёрный хлеб.
  2. Варенье.
  3. Мёд.
  4. Сироп.
  5. Овощи.
  6. Сахар.

Диарея устраняется известными народными средствами. Употребляют продукты с танином: заварка (запивается водой), сушёная черника, корки лимона и граната, горошины чёрного перца, столовая ложка крахмала. Полезно употреблять сыр, творог, добавлять кальций к ежедневному рациону.

Источник: http://GastroTract.ru/bolezn/disbioz/diagnostika-disbakterioza-kishechnika.html

Основные методы диагностики дисбактериоза кишечника

Диагностика дисбактериоза кишечника

Диагноз дисбактериоза устанавливается на основании клинической картины, отсутствия эффекта или ухудшения состояния после применения антибиотиков. Для подтверждения диагноза дисбактериоза кишечника, помимо клинической картины, большое значение имеют данные лабораторных методов (бактериологических и серологических). При этом необходимо повторное обнаружение в посевах кала обильного роста условно-патогенных бактерий, таких как бактерий рода протея, стафилококков, дрожжеподобных грибов, лактозонегативных эшерихий и др.

Методика исследования кала на дисбактериоз.Исследуются испражнения больных (5-10 г), которые собирают в стерильные баночки. Консервант к испражнениям не добавляется. Для сбора испражнений используются горшки, судна и другая посуда, в которую кладется плотная стерильная бумага для защиты материала от возможных следов дезраствора. Собранный материал следует немедленно доставить в лабораторию и до посева хранить в холодильнике, но не более 4 ч. Особенно важно сбор материала проводить до начала антибактериального лечения.

Для выявления анаэробной микрофлоры рекомендуется разводить испражнения физиологическим раствором в 10 раз. Из этого основного разведения делают ряд последующих (1 : 100, 1 : 1000, 1 : 10000, 1 : 100000). Из последнего разведения делают посевы по 0,1 мл на среды Эндо, Левина, Сабуро, Плоскирева, кровяной агар и др. Количество кишечной палочки и других микробов в 1 г фекалий определяют по числу колоний, выросших на соответствующей питательной среде с пересчетом на количество посеянного материала и степень его разведения.

На 5% кровяном агаре учитывают процентные соотношения между колониями, обладающими и не обладающими гемолизирующими свойствами. Палочку протея легко обнаружить в посеве на агаре по Шукевичу (Н-форма) или среде Ресселя с мочевиной — окрашивание в фиолетово-коричневый цвет при индикаторе тимоловый синий с добавлением кислого фуксина. Чашки со средой Сабуро выдерживают в термостате в течение 3-5 дней, затем плотные колонии пересевают в среду с солодовым суслом и также помещают в термостат на 3-4 дня. При исследовании нативного препарата можно видеть длинные или короткие нити мицелия, характерные для патогенных дрожжеподобных грибов.

Для выявления анаэробных бифидобактерий необходимо делать посев на модифицированную среду Блаурококка. Посев фекалий делают в больших разведениях. На среду Блаурококка засевают 1 г фекалий в разведении от 106 до 1011. Посевы ставят в термостат при 37°С на 24 ч. Из посевов, в которых виден ст в виде помутнения всей среды или отдельных колоний, готовят мазки и Рашивают их по Граму. Обнаружение характерных грамположительных палочек с разветвлениями на концах в виде римской цифры V, с несколько утолнными концами подтверждает их принадлежность к бифидобактериям. Выделение чистой культуры бифидобактерий является очень трудоемким и не обязательным, так как определение разведения, в котором их обнаруживают является вполне достаточным для оценки нормального или пониженного содержания в фекалиях.

При описании кишечной микрофлоры обращают внимание на процентные соотношения следующих микроорганизмов:

  1. лактозонегативных энтеробактерий по отношению к общему числу колоний, выросших на среде Эндо;

  2. гемолизирующей кишечной палочки по отношению к общему числу колоний этого микроба на среде Эндо;

  3. кокковых форм (стафилококков и энтерококков) по отношению ко всем выросшим на кровяном агаре колониям;

  4. гемолизируюших кокковых форм к их общему числу на кровяном агаре.

Кроме этого, обязательно отмечается выделение протея, патогенного стафилококка, грибов Candida, синегнойной палочки и др.

Примеры ответов:

  1. Выявлен незначительно выраженный дисбактериоз кишечника, характеризующийся преобладанием гемолитической кишечной палочки (35%) и наличием коагулазоположительного стафилококка.

  2. Выявлен резко выраженный дисбактериоз кишечника, характеризующийся значительным процентом лактозонегативных эшерихий (70%), гемолизирующего энтерококка (63%), наличием патогенного стафилококка и грибов Candida.

При генерализованном дисбактериозе, когда в патологический процесс вовлекаются кроме кишечника другие органы и системы, следует производить бактериологическое исследование не только фекалий, но также крови и мочи. Кроме традиционного бактериологического исследования показана также микроскопия фекального мазка.

В случае подозрения на кандидамикоз лабораторные исследования состоят из следующих этапов:

  1. микроскопическое исследование испражнений и мочи;

  2. изучение культуральных и биохимических свойств выделенных грибов;

  3. постановка серологических реакций и аллергических проб — реакция связывания комплемента с убитой дрожжеподобной вакциной и полисахаридной фракцией из культуры Candida albicans.

Реакция связывания комплемента считается положительной при разведении сыворотки 1:10 и выше. Реакция агглютинации со взвесью живой культуры дрожжеподобного гриба. Эта реакция считается положительной при разведении сыворотки 1:200 и выше. Обнаружение при микроскопическом исследовании нитей псевдомицелия или почкующихся клеток, а также обильный рост колоний гриба Candida на среде Сабуро дает основание предполагать грибковый дисбактериоз.

Содержание микрофлоры кишечника в норме

Наименование микроорганизмов

КОЕ/г фекалий

Бифидобактерии

108-1010

Лактобактерии

106-109

Бактероиды

107-109

Пептококки и псптострсптококки

105— 106

Эшерихий

106-108

Стафилококки (гемолитические, плазмокоагулируюшие)

Не более 103

Стафилококки (негемолитические, эпидермальные, коагулазоотрицательные)

104-105

Стрептококки

105-107

Клостридии

103-105

Эубактерии

109-10’°

Дрожжеподобные грибы

Не более 103

Условно-патогенные энтеробактерий и нефермеитирующие грамотрицательные палочки

Не более 103-104

Состав микрофлоры кишечника здорового человека представлено в таблице в колониеобразующих единицах (КОЕ) на 1 г фекалий.

У большинства больных при дисбактериозе кишечника возникают как количественные, так и качественные изменения нормальной микрофлоры. Дисбактериоз кишечника проявляется повышенным количеством кишечной палочки со слабо выраженными ферментативными свойствами (> 10%), появлением лактозонегативных энтеробактерий (> 5%), гемолизируюших эшерихий и др.

Весьма показательным признаком дисбактериоза также считают снижение способности микрофлоры инактивировать кишечные ферменты — энтерокиназу и щелочную фосфатазу. Обычно в фекалиях здорового человека они присутствуют в весьма незначительных количествах, а у больных с гастроэнтерологической патологией, особенно с заболеваниями кишечника с сопутствующим дисбактериозом, концентрация их резко возрастает.

Исследование индола, летучих фенолов, желчных и карбоновых кислот позволяет косвенно оценить биохимическую активность кишечной микрофлоры.

Дисбактериоз является динамичным процессом, в котором можно условно выделить отдельные этапы развития.

При преобладании в кишечнике бродильных процессов обращают на себя внимание резко кислый запах испражнений, значительное количество крахмальных зерен и переваренной клетчатки. Кал обычно жидкий с примесью пены, реакция кислая. При микроскопическом исследовании мазков кала, окрашенных раствором Люголя, выявляют большое количество клеток крахмала и обильную йодофильную флору.

Для гнилостной диспепсии характерен жидкий или кашицеобразный стул коричневого цвета со зловонным запахом. Кал имеет щелочную реакцию. При микроскопии в испражнениях обнаруживают остатки непереваренных мышечных волокон.

При копрологическом исследовании для слизистой колики типична примесь к испражнениям трубкообразной или лентообразной слизи, что обусловлено ее гиперсекрецией и спастическим состоянием толстой кишки. В слизи большое количество эозинофилов, кристаллов Шарко-Лейдена, в ряде случаев — много кристаллов кислого кальция фосфата.

Жидкие испражнения отражают гиперсекрецию в толстой кишке. При ложном поносе стул всегда водянистый или кашицеобразный, обычно с признаками бродильной диспепсии. Копрограмма при кишечном дисбактериозе нередко характеризуется повышенным содержанием лейкоцитов, часто одновременно с эритроцитами. Реакция на белок может быть положительной (определяется методом Гауфона).

Для запора типично исчезновение клетчатки или крахмала и вместе с тем отсутствие йодофильной флоры. При нарушениях пищеварения в илеоцекальном отделе кишки, обусловленных дисбактериозом, кал чаще не оформлен, золотисто-желтого цвета, запах кислый, реакция слабокислая. При копрологическом исследовании обнаруживается в большом количестве перевариваемая клетчатка и внутриклеточный крахмал, обильная йодофильная флора, в незначительном числе измененные мышечные волокна и расщепленный жир.

При дистальном колите кал не оформлен, содержит слизь, нередко в большом количестве, в нем много лейкоцитов, клеток кишечного эпителия.

Дискинетический синдром характеризуется фрагментами кала, окутанными слизью.

Синдром недостаточности всасывания (синдром мальабсорбции) — клинический симптомокомплекс, обусловленный нарушением питания организма вследствие расстройств процессов абсорбции в тонкой кишке. Чаще развивается при патологии тонкой кишки, в том числе и при дисбактериозе. Кроме того, синдром может быть связан с нарушением гидролиза пищевых веществ в результате снижения продукции пищеварительных ферментов в желудке и поджелудочной железе с уменьшением всасывательной поверхности кишки при ее резекции, лимфогранулематозе и других патологических процессах в ней. Синдром мальабсорбции характеризуется расстройством обмена веществ — жирового, углеводного, белкового, водно-солевого, а также нарушением обмена витаминов.

Источник: http://medic.ua/bolezn/diagnostika-disbakterioza-kishechnika/
Еще интересное порево: